熱啟動直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶說明書
產(chǎn)品詳情
本酶為Taq-D DNA聚合酶(KlenTaq1)的熱啟動型,需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活。Taq-D DNA聚合酶是大腸桿菌重組表達(dá)的嗜熱細(xì)菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶(刪除了5’ 外切酶結(jié)構(gòu)域)。該酶具有5’→3’聚合酶活性,無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探針法q-PCR。本酶經(jīng)基因工程改造,尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型。擴(kuò)增片段的長度可達(dá)3 kb。延伸速度為1.0 kb/min(72℃)。
特點(diǎn)
本酶為熱啟動聚合酶,可提高擴(kuò)增的特異性,減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體;
熱穩(wěn)定性好:95℃下半衰期超過40 min;
模板DNA耐受范圍廣;
PCR產(chǎn)物具有3’-dA尾巴,可直接用于T/A克隆;
可以摻入dUTP、dITP、熒光標(biāo)記核苷酸。
相比普通Taq DNA 聚合酶,本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR;
濃度2.5U/μl活性定義
以大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內(nèi),將10 nmole脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量,定義為一個(gè)活性單位(U)。
酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol.
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
Component | 78DC10013-250u | 78DC10013-250U×5 | 78DC10013-1250U×4 | 78DC10013-2500U×5 |
HS Taq-D DNA polymerase(KlenTaq1) | 250U | 250U×5 | 1250U×4 | 2500U×5 |
10×Taq-D Buffer | 0.5 ml×1 | 0.5 ml×5 | 1.0 ml×10 | 1.0 ml×25 |
適用范圍
溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型
DNA熒光標(biāo)記
血液、組織樣本等直擴(kuò)PCR
應(yīng)用舉例
以下反應(yīng)舉例為50 μl標(biāo)準(zhǔn)PCR體系, 僅供參考。實(shí)際PCR條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化,確定最佳反應(yīng)條件。
組份 | 體積/μl | 終濃度 |
10×Taq-D Buffer | 5 | 1× |
dNTPs(2.0 mM) | 5 | 0.2 mM |
引物F(10 μM) | 1.5 | 0.3 μM |
引物R(10 μM) | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
HS Taq-D(2.5U/μl) | 1.0 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體積 | 50 | / |
*DNA template可參照如下標(biāo)準(zhǔn)(50 μl PCR體系):
人類基因組DNA | 0.1 μg-1 μg |
λDNA | 0.5 ng-5 ng |
質(zhì)粒DNA | 0.01 ng-1 ng |
大腸桿菌DNA | 10 ng-100 ng |
PCR反應(yīng)條件
95℃ | 5 min | |
95℃ | 15 sec | |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1 min/kb | |
72℃ | 5 min |
注意事項(xiàng)
本酶為熱啟動聚合酶,需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活;因此有利于提高擴(kuò)增的特異性,減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體,得到良好的PCR結(jié)果。
Taq-D DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性,因此在PCR產(chǎn)物3’末端通常會加上1個(gè)多余的腺嘌呤。
堿基出錯(cuò)率是指在每個(gè)堿基合成過程中所摻入的錯(cuò)誤核苷酸數(shù)目。Taq-D DNA聚合酶的堿基錯(cuò)誤率為1×10-5。
對非熱啟動酶而言,建議在冰上配置PCR 反應(yīng)液后,再放入PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。這有利于提高擴(kuò)增的特異性,減少非特異性擴(kuò)增,得到良好的PCR結(jié)果。
如進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,除目的條帶外,還伴隨其他雜帶,建議適當(dāng)減少體系中的酶用量,以增加PCR擴(kuò)增反應(yīng)的特異性
本公司Buffer經(jīng)大量PCR反應(yīng)實(shí)例優(yōu)化而成,然而對某些PCR反應(yīng)存在一個(gè)最you的鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度,請購買本公司不含鎂離子的buffer和MgCl2/MgSO4。
本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用,臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定,不可用于醫(yī)療臨床診斷。
質(zhì)量控制
相關(guān)測試表明無外源內(nèi)切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。
室溫放置一周,擴(kuò)增活性無明顯改變;但強(qiáng)烈建議不要在室溫下長期放置,用畢放回-20度。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78DC10013-250U | 熱啟動直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶 | 250U | BIOHUB |
78DC10013-250U×5 | 熱啟動直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶 | 250U×5 | BIOHUB |
78DC10013-1250U×4 | 熱啟動直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶 | 1250U×4 | BIOHUB |
78DC10013-2500U×5 | 熱啟動直擴(kuò)型Taq DNA聚合酶 | 2500U×5 | BIOHUB |