組成
Component | 78GD10081-100mL | 78GD10081-500ML |
蘇木素染液 | 100 mL | 500 mL |
伊紅染液(醇溶) | 100 mL | 500 mL |
1. 樣本前處理
(1) 對(duì)于石蠟切片:切片依次經(jīng)二甲苯脫蠟10 min,更換新鮮的二甲苯脫蠟10 min,無(wú)水乙醇 5min,新鮮無(wú)水乙醇5 min,90%乙醇5 min,75%乙醇5 min,自來(lái)水洗。
(2) 對(duì)于冰凍切片:-20℃保存的冰凍切片需靜置5-10 min恢復(fù)至室溫。如需固定,則經(jīng)所需固定液室溫后自來(lái)水洗。
2. HE染色
(1) 蘇木素染色:上述處理好的切片,進(jìn)入蘇木素染液染色3-5 min,自來(lái)水洗;
(2) 分化:切片經(jīng)蘇木素分化液2-5 s,自來(lái)水流水充分沖洗;
(3) 返藍(lán):蘇木素返藍(lán)液返藍(lán)2-5 s,自來(lái)水流水充分沖洗;
(4) 伊紅染色:切片依次經(jīng)85%、95%梯度乙醇脫水,各5 min。然后進(jìn)入伊紅染液(醇溶)中染色5 min,經(jīng)兩次無(wú)水乙醇脫水各5 min;
(5) 透明:切片再經(jīng)新鮮無(wú)水乙醇脫水5 min,二甲苯透明5 min,更換新鮮的二甲苯再透明5 min。
(6) 封片:滴加中性樹膠進(jìn)行封片。
1. 染色后用特定溶液將組織中過(guò)多結(jié)合的染液脫去,這個(gè)過(guò)程稱為分化作用,所用溶液稱為分化液。在HE染色種常用低濃度鹽酸作為分化液,因?yàn)樗崮芷茐奶K木素的醌型結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu),使色素與組織分離而褪色。組織在經(jīng)蘇木素染色后,必須經(jīng)過(guò)分化去除組織中過(guò)多結(jié)合及非特異性吸附的染料,才能進(jìn)行伊紅染色,確保細(xì)胞核與胞漿顯色分明??墒褂?span style="box-sizing: inherit; font-family: ">78NB10002蘇木素分化液。分化過(guò)程中,根據(jù)組織切片厚度、組織類型等結(jié)合鏡下觀察適當(dāng)調(diào)整分化時(shí)間。
2. HE染色中蘇木素染色后的返藍(lán)很重要。蘇木素在酸性條件下為離子狀態(tài),呈紅色;在堿性條件下呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性分化液分化后呈紅色或粉紅色,需立即水洗終止分化,再用弱堿性溶液使蘇木素,這個(gè)過(guò)程就是返藍(lán)作用。如果沒(méi)有專用的返藍(lán)液,用溫水浸洗也能使細(xì)胞核返藍(lán),只是所需時(shí)間略長(zhǎng)。推薦78NB10003蘇木素返藍(lán)液。
3. 蘇木素及伊紅染色程度可以根據(jù)染色需要進(jìn)行調(diào)整染色時(shí)間。
4. 蘇木素染液可重復(fù)使用多次,每次用完后需密封保存,防止有效成分揮發(fā)。當(dāng)組織或細(xì)胞著色明顯偏淺或顏色異常時(shí)請(qǐng)更換新的染液。
5. 用于染色后脫水的無(wú)水乙醇純度需大于99.9%。如果乙醇含水,伊紅會(huì)褪色導(dǎo)致染色不均勻。
6. 伊紅染液(醇溶)可反復(fù)使用數(shù)次,當(dāng)組織著色明顯偏淺時(shí)建議更換新的染液。
7. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,佩戴一次性手套。
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
78GD10081-100mL | HE染液 | 100mL | BIOHUB |
78GD10081-500mL | HE染液 | 500mL | BIOHUB |
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